Vér vérének elemzése, mi az

Étrend

A Tandem tömegspektrometria (TMS) a vegyületelemzés modern módszerei közé tartozik, amelyet széles körben alkalmaznak különböző tudományos és gyakorlati célokra. Ez a módszer lehetővé teszi több száz vegyület mikroszennyezőanyag-analízisét.

Hol alkalmazzák ezt a módszert?

A világ egészségügyi gyakorlatában ezt a módszert alkalmazzák az örökletes anyagcsere-betegségek újszülöttek tömeges szűrésére (NBD). A szárított vér helyén lehet meghatározni az aminosavakat (beleértve a fenil-alanint) és az acil-karnitineket. A kvantitatív meghatározása ezen anyagok lehetővé teszi, hogy kizárják több tíz örökletes betegségek kapcsolatos a különböző osztályok az nBo (rendellenességek aminosav-anyagcsere, hibák a szerves savak és zsírsavak a mitokondriális β-oxidáció). A külföldi irodalmi adatok szerint, teljes gyakorisága 1: 2000 élő újszülött. Korábban, a diagnózis az ilyen rendellenességek igényel nagy mennyiségű biológiai anyag, számos tanulmány (aminosav-analízis, gázkromatográfiás-spektrometria meghatározására acil-karnitinek spektrum), amely szükséges jelentős időt és anyagi költségek. A TMS lehetővé teszi számodra az összes vegyület számszerűsítését egy elemzés során!

Milyen betegségek mutathatók ki ezzel a módszerrel?

Sajnálatos módon még nem létezik egy egyetemes, rendkívül érzékeny és specifikus teszt az összes ismert NBO diagnosztizálására, de az elemzés során több tucat vagy akár több száz betegség azonosítására szolgáló technológia már valósággá válik. Az ilyen módszerekre a TMS vonatkozik. Ez a módszer nagy megbízhatósággal azonosítja az aminosavak, szerves savak és a zsírsavak mitokondriális béta-oxidációjának 40 örökletes anyagcserezavarát. A legtöbb ilyen betegség az újszülöttek időszakában fordul elő. Az ezen technológiával diagnosztizált megbetegedések listáját az elemzési szakasz tartalmazza http://labnbo.ru/prajs-list

Miért szükséges a metabolikus betegségek diagnosztizálása a lehető leghamarabb?

Sok orvos tévesen úgy véli, hogy az NBO-k annyira ritkák, hogy csak az utolsó helyen kell kizárni őket, és nagyon gyakran a helyes diagnózist már egy későbbi időpontban állapítják meg, vagy egyáltalán nem diagnosztizálják a betegséget.

Azonban az NBO több mint 150 olyan formája, amelyre a hatásos terápia módszereit kifejlesztették, és a beteg életének és egészségének mennyisége attól függ, hogy milyen gyorsan és helyesen határozzák meg a diagnózist, már ismert. A TMS-vel diagnosztizált 20 betegség esetén speciális kezelést fejlesztettek ki. Az időbeli diagnózisban - a beteg életének és egészségének mentése!

A vérminták gyűjtésének szabályai

A vér egy standard szűrőkártyán (903) van összegyűjtve, amelyet az újszülöttek megfigyelésére használnak a PKU-ban. A vér lehet a kapilláris (az ujjak, a sarok) és a vénás. Szükség van a kiválasztott területnek a szűrőn jól átitatni! A szűrőkártyán világosan fel kell tüntetni a születési dátumot és a kezelőorvos telefonszámát, a beteg neve és címe. A mintát 2-3 órán át levegőn szárítjuk. Célszerű kivonatot csatolni a kórelőzményből.

Példa a vérminták helyes gyűjtésére:

Példák a vérminták nem megfelelő gyűjtésére:

Sok apró folt

A mintát nem száradtuk meg a végére, ami a minta elmosódását eredményezte a szállítás során.

A szűrőpapírt rosszul impregnálta a vér.

Hasznos linkek:

(NCBI) az 1988-ban alapított molekuláris biológiai információs nemzeti erőforrás. A PubMed adatbázis több mint 15 000 000 különböző orvosbiológiai folyóiratot tartalmaz (angolul).

Az emberi gének és genetikai betegségek katalógusa, melyet Dr. V.A. McKusick és kollégái (angol nyelven).

(SSIEM) - Társaság az örökletes anyagcsere-betegségek tanulmányozására (veleszületett anyagcserezavarok).

Szövetségi állami költségvetés Tudományos Intézet "Orvosi Genetikai Tudományos Központ"

Információs portál a ritka betegségekről, a kezelésük és diagnosztikájuk lehetőségeiről a ritka betegségekben

A ritka betegségekkel foglalkozó All-Russian Társaságot 2012-ben hozták létre a betegek, családtagjaik és szakértőik kezdeményezésére. A mai napig a VOZ több mint 400 beteget egyesíti az Orosz Föderáció 47 régiójából 63 ritka betegséggel.

Vér vérének elemzése, mi az

Az évek során általában szűrés történt tesztek, minden egyes betegségre specifikus. Például a PKU-szűrés a növekvő fenilalanin mikrobiológiai vagy kémiai értékelésén alapult.

Ez a helyzet az utóbbi időben teljesen megváltozott évtized a tandem tömegspektrometria (TMS) technológiájának megjelenésével. Elemzés a tandem tömegspektrometria (TMS) nem csak pontosan és gyorsan érzékeli emelkedett fenilalanin vérfolt az újszülött kevesebb álpozitív válaszok képest régebbi módszerek, de azt is lehetővé teszi, hogy egyidejű kimutatására is több tucat más biokémiai rendellenességek.

Néhányat már átvizsgálták egyedi tesztek. Például, számos állam használt specifikus tesztek kimutatására megnövekedett metionin, hogy érzékeli a tandem tömegspektrometria (TMS) szintén nem volt megbízható módszer szűrésére-onatalnogo bizonyos betegségek releváns szűrési kritériumokat, de nem volt megbízható vizsgálati korábban.

Például, MCAD hiány - zsírsav-oxidáció rendellenesség általában tünetmentes, de klinikailag kimutatható, amikor a beteg megnövekedett katabolizmus. Kimutatása MCAD hiány születéskor bizonyulhat fontos, mint a beteg gyerekek nagyon magas kockázata életveszélyes hipoglikémia korai gyermekkorban a katabolikus által okozott állapotok közötti kurrentnymi betegségek, mint például a vírusos fertőzés.

A gyermekek majdnem negyede gyermekekkel nem diagnosztizált MCAD-hiány a hipoglikémia első epizódjában halnak meg. Megfelelő kezeléssel a metabolikus rendellenességet be lehet állítani. MCAD hiány, ha az elsődleges cél a szűrés - figyelmeztetés a szülők és az orvosok a kockázata a metabolikus dekompenzáció, mint a gyermekek között a rohamok szinte egészséges, és nem kell a napi kezelést, kivéve kivételek tartós koplalás.

Ennek ellenére a tandem tömegspektrometria (TMS) az újszülöttkori szűréshez továbbra is megkérdőjelezhető. Azon kívül, hogy a gyors vizsgálat számos betegség, újszülöttkori szűrése, ami már folyamatban van, vagy indokolt lehet, tandem tömegspektrometria (TMS) is meghatározza csecsemők veleszületett anyagcsere, például methylmalonic acidózist, általában nem tartalmazza a szűrésben miatt ritkasága és a nehézsége, hogy végső terápia, amely megakadályozza a progresszív neurológiai romlást.

Tandem tömegspektrometriával kimutatott betegségek

I. Aminoatsidemii:
- PKU
- A juharszirup illatú vizeletürítés
- homocystinuria
- Tsitrullinemiya
- Arginin-borostyánkősav
- I. típusú tirozinémia

II. Szerves savak:
- Propionsavas acidemia
- Metil-malonsav acidemia
- Izovalerikus savasodás
- Elkülönített 3-metil-krotonil glicinémia
- Glutár-acidemia (I. típusú)
- Mitokondriális acetoacetil-coA-tioláz hiány
- Hidroximetilglutársavasav
- Több CoA karboxiláz elégtelensége

III. A zsírsavak oxidációjában fellépő zavarok:
- Nincs elég SCAD
- Hidroxi-SCAD hiány
- Nem elegendő MCAD
- Nincs elég VLCAD
- LCAD hiánya és a trifunkcionális fehérje elégtelensége
- II. Típusú glutár-acidemia
- A karnitin-palmitoil-transzferáz II. Elégtelensége

Tandem tömegspektrometria (TMS) szintén azonosítani tudják az abnormális metabolitokat, amelyek bizonytalan egészségügyi értékkel rendelkeznek. Például az SCAD-hiány a zsírsav-oxidáció egyik leggyakoribb tünetmentes betegsége, bár néhány betegnél nehézségek merülhetnek fel az epizodikus hipoglikémiával kapcsolatban. Ezért a tandem tömegspektrometria (TMS) analízisének pozitív eredménye a tünetekkel járó SCAD esetében valószínűleg nagyon alacsony.

Az észlelés előnye meghaladja-e a mérést A SCAD elégtelensége a teszt negatív hatása, ami a szülők indokolatlan szorongását okozta az újszülöttek többségének, akik pozitív eredményt mutattak, akik soha nem mutatták klinikai tüneteket? Így nem minden, a tandem tömegspektrometriás módszerrel (TMS) kimutatott betegség megfelel az újszülöttkori szűrés kritériumainak.

Ezért van néhány szakértők az egészségügyi rendszerben azt állítják, hogy a szülők és az orvosok csak jelentett klinikai előnyökkel számolhatnak a rendellenességekről a metabolitokban. Egyéb szószólója a használatból az összes által szolgáltatott információk tandem tömegspektrometria (TMS), és felajánlja, hogy tájékoztassa az orvosok és a szülők minden rendellenes metabolitok, nem számít, mennyire jó a betegség kritériumainak megfelelnek a szabványos újszülöttkori szűrés. A jövőben gondosan figyelemmel kísérheti az ismeretlen jelentőségű anomáliákban szenvedőket. Mindezen okok miatt a tandem tömegspektrometria (TMS) alkalmazása újszülöttek szűrésére továbbra is vita tárgyát képezi.

mert népesség szűrés a születés előtti időszakban két tesztet alkalmaznak: kromoszóma analízis idősebb nőknél és az anya szérum AFP-je vagy tripsz teszt DNT és kromoszóma aneuploidia esetén.

Ha a terhesség veszélybe miatt in - invazív eljárások prenatális diagnosztikájában kromoszóma-aneuploidia miatt anyai kor, meg kell is kínál kiegészítő ellenőrzés, például szintjének meghatározása AFP a magzatvízben, genomot keresést összehasonlító hibridizációs veszélyes szubmikroszkópos deléciókat, mutációkat szűrés cisztás fibrózis és más gyakori betegségek leküzdésében.

Vér vérének elemzése, mi az

A tandem tömegspektrometria a vegyületelemzés modern módszerei közé tartozik, amelyet széles körben alkalmaznak különböző tudományos és gyakorlati célokra. Ez a módszer lehetővé teszi több száz vegyület mikroszennyezőanyag-analízisét. A világ egészségügyi gyakorlatában ezt a módszert alkalmazzák az újszülöttek tömeges szűrésére az örökletes anyagcsere-betegségek (NBD) esetében. A szárított vér helyén lehet meghatározni az aminosavakat (beleértve a fenil-alanint) és az acil-karnitineket. Ezeknek az anyagoknak a mennyiségi meghatározása lehetővé teszi az NBO különböző osztályaiba tartozó több tucat örökletes betegség kizárását (aminosavak, szerves savak és a zsírsavak mitokondriális b-oxidációjának hiányosságai). Korábban, a diagnózis az ilyen rendellenességek igényel nagy mennyiségű biológiai anyag, számos tanulmány (aminosav-analízis, gázkromatográfiás-spektrometria meghatározására acil-karnitinek spektrum), amely szükséges jelentős időt és anyagi költségek. A TMS lehetővé teszi számodra az összes vegyület számszerűsítését egy elemzés során! Az aminosavak, a szerves savak és a zsírsavak mitokondriális béta-oxidációjának örökletes rendellenességei körülbelül 100 nosológiai formában fordulnak elő, amelyek nagyrészt a neonatális időszakban jelentkeznek. Gyakorisága több mint 1: 5000 újszülött. Sok orvos tévesen úgy vélik, hogy ez a csoport a betegségek olyan ritka, hogy kell kizárni a legvégső, és nagyon gyakran a helyes diagnózis már a későbbi szakaszában a betegség vagy nem diagnosztizált egyáltalán.

Az elemzés során 52 mutatót (aminosavakat és acilkarniniumot)

Vizsgálati anyag: száraz formájú vért kapilláris

A tanulmány elkészítése: nem

Fogadási napok: az egészségügyi központ munkaideje alatt

No. НБО1, Újszülöttek szűrése. "Ötödik" (az aminosavak és az acilkarnitinek spektrumának elemzése)

  • A betegség hasonló esetei a családban.
  • A gyermek korai életkorának hirtelen halálának esetei a családban.
  • A gyermek állapota élesen romlik a normális fejlődés rövid időszaka után (a tünetmentes időtartam több óra és több hét között is eltarthat).
  • Szokatlan testszag és / vagy vizelet ("édes", "egér", "főtt káposzta", "izzadt láb" stb.).
  • Neurológiai rendellenességek - mentális rendellenességek (letargia, kóma), különböző típusú görcsös támadások, az izomtónus megváltozása (izomhipotézia vagy spasztikus tetraparézis).
  • A légzés ritmusa (bradypnoe, tachypnea, apnoe).
  • Egyéb szervek és rendellenességek (májkárosodás, hepatosplenomegalia, cardiomyopathia, retinopátia).
  • Változások a laboratóriumi paraméterek a vér és a vizelet - neutropenia, anaemia, metabolikus acidózis / alkalózis, hipoglikémia / hiperglikémia, fokozott aktivitás a máj enzimek és a kreatin-kináz szintek, ketonuria.
  • 37 örökletes anyagcsere-betegség további diagnosztizálása 5 kötelező öröklődő betegség kimutatására kötelező állapotprogrammal: újszülöttek szűrése: "PYATOCHKA".

A kutatás eredményeinek értelmezése a kezelőorvos számára információkat tartalmaz, és nem diagnózis. Az ebben a szakaszban található információk nem használhatók önellenőrzésre és öngyógyításra. Az orvos pontos diagnózist készít, mind a felmérés eredményeit, mind a más forrásokból származó szükséges információkat felhasználva: anamnézis, más felmérések eredményei stb.

Laboratóriumi egységek INVITRO: μmol / liter.

AZ ANYAGOK CSERÉJEIN KÍSÉRLETI SZEMÉLYES BETEGSÉGEK LABORATÓRIUMA

TMS analízisre utaló jelek

Az aminosavak, szerves savak és a mitokondriális b-oxidációs rendellenességek veleszületett metabolikus rendellenességének klinikai diagnózisa bizonyos nehézségeket okozhat, mivel ezeknek a betegségeknek nincs specifikus specifikus tünetei és tünetei. Ezért az újszülött patológiás osztályok, a gyermekek intenzív osztályainak valamennyi betegének tanulmányozása segíthet ezen örökletes betegségek gyors kimutatásában.

Az acilkarnitinek és aminosavak TMS-sel történő vizsgálatára utaló jelek:


7. Változás a vér és a vizelet - thrombocytopenia, neutropenia, anaemia, metabolikus acidózis / alkalózis, hipoglikémia / hiperglikémia, emelkedett máj enzimek és a kreatin-kináz szintek, ketonuria.

Genetikai vizsgálatok

Lányok, mi neurológusnak küldjük a genetikát (azt mondta, hogy az agyi bénulás nem a diagnózisunk, bár elvitte a szanatóriumba). Mondja meg, ki szembesült ezzel? Még nem tudom, hogy mi fogunk küldeni, de szeretném tudni, hogy mennyi az előkészítés, ez nem általános vérvizsgálat...

MobilalkalmazásBoldog anya 4.7 Kommunikáció az alkalmazás sokkal kényelmesebb!

Nem mondhatom. bármi is lehet. és minden más módon különbözik

Sok mindent lemondtunk! A kariotípus 4000 rubelt., TMS 4000 rubelt amminokisloty vizelet 4 alkalommal (10,000 rubelt minden), amminokisloty vér 4-szer is, mintegy 10.000 rubelt, 12.000 rubel Dravet szindróma, laktát sokszor nem olcsó konzultáció genetika és miegymás „PO- Kis dolgok. "A genetikai vizsgálat nem olcsó!

Multi-szteroid vérvizsgálat: a létfontosságú humán hormonok meghatározása minőségi új szinteken

A "multi-szteroid analízis" kifejezés a szteroid hormonok profiljának a kromatográfiás-tömegspektrometriás módszerrel történő meghatározására vonatkozik. Az elemzés eredményeinek összességét a "szteroidprofil" kifejezés jelöli. Lényegében két egyenértékű kifejezés ugyanazt jelenti.

Multisteroidny elemzése - a hazai fejlesztési, a technika elemzés validált és hitelesített „eljárást (A módszer) mérése tömegkoncentrációja szteroid hormonok vérmintákban folyadékkromatográfiával -. A tandem tömegspektrometria MU 08-47 / 376”, bejegyzésre Rosstandart szám alatt FR.1.31.2015.21875.

Jelenleg a multiszteroid analízis nem szerepel az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériumának által jóváhagyott és tudományos kutatás részeként jóváhagyott vizsgálati jegyzékben. Maguk a betegek kénytelenek fizetni ennek az elemzésnek a költségeit. A munka folyamatban van annak biztosítására, hogy a jövőben ezek a költségek a biztosítási gyógyszer fedezetéül szolgáljanak.

Mennyiségi meghatározását a fő szteroid hormonok és a szérum metabolitok vagy nyál-folyadék referencia módszerrel - gázkromatográfiás-tandem tömegspektrometria (a szakirodalomban ez a módszer is nevezik LC-MS / MS) - a munkaigényes és költséges eljárás. Az egyik legfontosabb jellemzője a módszer az a képesség, hogy meghatározza az összes bejelentett analitok egyetlen vizsgálatban (ábra. 1), azonban alapuló meghatározása az analit kapott érték aligha valószínű, nem kevesebb, mint az alternatív immunkémiai módszerekkel.

1. ábra: Az analízis során meghatározott elemzések az eljárás szerint

Miért van a technika neve a bioméret "vérének" megjelölésével?

Annak érdekében, hogy azonnal megkülönböztessük azt a széles körben ismert "vizelet szteroid profiljától". Meg kell jegyezni, hogy az információ tartalmát a vizelet elemzés egészen más, és szükségessé más kezelést, amint az a vizelettel nagymértékben inaktív formái szteroidok: szulfátok, glukuronidok és hidroxilezett származékok nem kívánt mikroorganizmus, és adjuk ki. A vér koncentrációja határozza meg az aktív formáit szteroid hormonok, amelyek keringenek a vérellátás a teljes rendszer, lép-sejtek és hatással jelet genom.

Mely orvosi körülmények között van a vér szteroid profiljának meghatározása, mely orvossal a vér szteroid profilja segít a diagnózisban?

1. A mellékvesekéreg (VDKN) mindenféle veleszületett diszfunkciója. A VDKN egy veleszületett betegség, amely a szteroid bioszintézis megsértésében nyilvánul meg. Ennek oka az, hogy megsértette a mellékvesekéreg 5 egyik enzimének működését. Ez lehet a 21a-hidroxiláz (CYP21) vagy 11b-hidroxiláz (CYP11B1) hiánya. A VDKN újszülöttek hagyományos szűrése immunoassay módszerekkel gyakran hamis pozitív eredményeket ad a 17-hidroxi-progeszteron meghatározásában. Ezért minden vitás esetben LC-MS / MS-vel megerősítő diagnózis szükséges [1]. Diagnózis a nem-klasszikus formája VDKN (NF VDKN) immunkémiai módszerekkel jelent számottevő nehézséget, így NF VDKN gyakran nem diagnosztizálják újszülöttkori szűrése, de teszi magát érezte később: serdülőknél korainak tűnik a haj növekedését, pattanások; lányok - hirsutizmus, menstruációs diszfunkció, reproduktív rendellenességek. A szteroid profil, amikor NF VDKN amelyre jellemző a megnövekedett 21-deoxycortisol és 17-OH-progeszteron, azonban multisteroidny elemzés kombinált genetikai vizsgálat rendkívül hasznos a betegség diagnosztizálására.

2. mellékvese elégtelenség. Ehhez ACTH-val végzett stimulációs vizsgálatot végzünk, és a kortizol, az aldoszteron és a 11-deoxikortisol szintjét mértük: bazális, 30 és 60 perccel a stimuláció után. Az elsődleges mellékvese-elégtelenségben az aldoszteron nem reagál a stimulációra, míg a másodlagos elégtelenségnél a szintjének emelkedését jegyzik fel. A kontrollcsoportban a 11-dezoxi-kortizol szintje 15-20-szorosára emelkedett az ACTH stimulálására, és a kortizol körülbelül 3-szorosa [2].

3. Hipogonadizmus a férfiakban. A hipogonadizmus férfiaknál történő helyes diagnózisa érdekében meg kell határozni a teljes tesztoszteron (TT) pontos szintjét tömegspektrometriával. Egy 10 000 önkéntes vizsgálatban azt találták, hogy hipogonadizmust lehet diagnosztizálni, ha a CT-koncentráció tömegspektrometriai adatok szerint 12,1 nmol / l alatt van [3].

4. A helyettesítés kezelésének ellenőrzése férfiaknál és nőknél (HRT). Ezeknél a betegeknél a tömegspektrometria az „arany standard,”, mivel ez lehetővé teszi, hogy válassza ki a megfelelő terápiás dózis a hormon (vagy stimulátor) nyomnyi részletesen a reakció az összes metabolit a szubsztitúciós terápia és az interferencia elkerülése érdekében inherens immunkémiai módszerek [4-6].

5. Nagyon fontos a szteroid hormonok szintjének monitorozása a terhesség alatt és egy évvel a szülés után. A multi-szteroidok sokkal pontosabb információt szolgáltatnak az androgén állapotról a hagyományos DHEA-szulfáthoz képest.

6. Nőgyógyászat. A "virilizáló" (androgéntermelő) mellékvese daganatok androgéntermelő aktivitást mutatnak, és a nőkben a virilis szindrómát fejlik ki. Megállapítást nyert, hogy gyakorlatilag bármely hormonálisan aktív petefészek-daganat forrása és / vagy ösztrogének túlzott termelésének forrása lehet, és a tandem tömegspektrometriás módszerrel kell diagnosztizálni [7].

7. Diabétesz. Ez a betegség befolyásolja az idegrendszert, és befolyásolja a neurosteroidok koncentrációját. Az LC-MS / MS lehetővé teszi a neuroaktív szteroidok koncentrációjának meghatározását annak érdekében, hogy új megközelítéseket dolgozzon ki a diabeteses nephropathia kezelésében [8].

8. Sportos orvoslás. A vér és a nyál sportolók szteroid profilja fontos információkkal szolgálhat az egészségi állapotáról, sportos formájáról, a terhelés optimális eloszlásának köszönhetően.

A multi-szteroid analízis aligha él önmagában, mivel az immunoassay-módszerek széles skálája és a hagyományos technológiákhoz való ragaszkodás ellenáll. De ez a módszer mögött a jövő, az orvostudomány legjobb képviselője [9].

Mi az ALS?

Az amyotrófiás laterális szklerózis a motoros neuronok leggyakoribb formája, amely neurodegeneratív betegség, amely az agyban és a gerincvelőben lévő motoros neuronokat befolyásolja

Az ALS diagnosztizálása

Az ALS tünetei eltérőek lehetnek a különböző embereknél, mivel a betegségnek egyedi jellege és a progresszió üteme van.

Az amyotrófiás laterális szklerózis rendkívül nehéz diagnosztizálni több okból:

  • ez ritka betegség;
  • a korai tünetek meglehetősen könnyűek, például a mancsok, a kényelmetlen kezek vagy a kissé merev beszéd, miközben a fentiek teljesen más okokból eredhetnek;
  • a betegség másképp érint minden embert, nincs határozott tünet, amit az ALS határozottan határoz meg.

Ha a terapeuta gyanítja, hogy a betegnek van ALS, akkor a neurológushoz kell fordulnia. Ezután egy személynek lehet egy sor diagnosztikai vizsgálata, amely mind a betegen, mind a betegen elvégezhető.

Vérvizsgálat

A vizsgálatok azt mutatják, hogy a kreatin-kináz szintje emelkedett-e a vérben. Ez az enzim akkor keletkezik, amikor az izomszövet megsemmisül, és szintje megemelkedhet az ALS-ben szenvedőknél. De ez a mutató nem az ALS specifikus jele, mivel ez más betegségek mutatója lehet.

Elektroneuromiográfia (ENMG)

Az ENMG segítségével a vékony tűk az egyes izmok idegimpulzusainak rögzítésére szolgálnak. A felvétel általában minden végtagból és bulbarból (garat) izomzatból történik. Az innervezést elvesztett izmokat azért találják meg, mert elektromos aktivitásuk eltér az egészséges izmok aktivitásától. Az ENMG eredményei eltérhetnek a normálistól, még akkor is, ha a specifikus izomot még nem befolyásolja a betegség.

Az ENMG segítségével ellenőrizni kell az impulzus sebességét az idegrostokon. Ehhez elektromos impulzust vezetünk át egy kis tömítéssel, amely érintkezik a bőrrel. Ez egy nagyon fontos diagnosztikai módszer a vizsgálat számára.

Transzkraniális mágneses stimuláció (TMS)

Ez egy új módszer, amely az ENMG-vel párhuzamosan hajtható végre. Úgy tervezték, hogy felmérje az agy motor idegsejtjeinek állapotát. A TMS eredményei segíthetnek a diagnosztizálásban.

Mágneses rezonancia képalkotás (MRI)

Az MRT képes észlelni az idegrendszer károsodását, az agyvérzés, az Alzheimer-kór, a Parkinson-kór, a szklerózis multiplex, a daganatok és a gerincvelő sérülések okozta. Az MRT nem mutat semmilyen specifikus változást az ALS-ben, mivel a betegség által okozott kár nem tükröződik a képeken. Ezt a kutatási módszert használják az ALS-hez hasonló tünetekkel járó betegségek kizárására.

Egyéb módszerek

A neurológus eldöntheti, hogy további vizsgálatokat végez, mint például ágyéki lyukasztás vagy izombiopszia, ha valami azt jelzi, hogy szükségük van rá. Ezeket a vizsgálatokat azonban nem mindig használják az ALS diagnózisában.

Tandem alkalmazása
tömegspektrometria (HPLC-MSMS)
a klinikai diagnózisban

A tömegspektrometria - a kilátás a fejlesztési klinikai kémia, a jövőben, ahol a forradalom klinikai diagnózis vezet a széles körben elterjedt használata tömegspektrometria.
(Michael Ulerich, Klinikai Kémia Tanszék, George August Egyetem, Goettingen, Németország)

Egy felmérés szerint közzétett klinikai biokémikus Vélemények, használata nagy teljesítményű folyadékkromatográfia párosul tandem tömegspektrometria (HPLC-MS / MS) klinikai laboratóriumokban rendkívüli mértékben megnövekedett az elmúlt 10-12 évben. A szerzők megjegyzik, hogy a specificitás elemzést HPLC-MS / MS lényegesen jobb immunológiai módszerek és a klasszikus nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC) elemzése a molekulák kis molekulatömegű, és egy lényegesen nagyobb teljesítményt, mint egy gázkromatográfiás-tömegspektrometriás (GC-MS). Ennek a módszernek a népszerűségét a rutin klinikai elemzésekben most a módszer egyedülálló képességeivel magyarázzák.

    A HPLC-MS / MS módszer fő előnyei:

  • A kis molekulák pontos kvantitatív elemzésének lehetősége;
  • A célvegyületek sorozatának egyidejű elemzése;
  • Egyedülálló sajátosság;
  • Nagy sebességű analízis.
  • Az utóbbi években nagy figyelmet fordítottak az elemzés idejére, és ennek eredményeként a laboratóriumi termelékenység növelésére. Az elemzési idő jelentős csökkenését lehetővé tette rövid analitikai oszlopok HPLC / MS / MS alkalmazásával, amelyek egyidejűleg jelentősen megnövelték az elemzés specifitását. A használata atmoszferikus nyomású ionizációs (API), egy tandem tripla kvadrupol tömegspektrométer, valamint egy javított HPLC, és a kapcsolódó mintakészítési módszerek eredményezte HPLC-MS / MS az első sorban a modern analitikai módszerek klinikai vizsgálatok céljára.

      A HPLC / MS / MS fő alkalmazási területei a klinikai orvostudományban:

  • A szteroidok (panelek), a purinok és a pirimidinek és egyéb vegyületek teljes metabolizmusának megszerzése,
    újszülöttek szűrése veleszületett anyagcsere-hibák esetén (több tucat betegség kimutatása egy elemzéshez);
  • A gyógyszerek terápiás monitorozása - immunszuppresszánsok, antikonvulzív, antiretrovirális, antikoagulánsok és bármely más - függetlenül a gyártó készleteinek elérhetőségétől. Nem kell drága készleteket vásárolnia minden anyaghoz - saját módszereit fejlesztheti;
  • Klinikai toxikológia - több mint 500 kábítószer és metabolitjainak elemzése egyetlen elemzésben, megerősítő elemzés nélkül
    a proteomika és a metabolomika.
  • Ezen túlmenően, HPLC IUMI szkrínelésére alkalmazott oligosaharidove húgyúti szulfatid dlinotsepochechnyh zsírsavak dlinotsepochechnyh epesavak, metil-malonsav, porfiria tanulmányok, szűrés betegek zavarok a purin és pirimidin anyagcsere.

    Példák a folyadékkromatográfiára
    tandem tömegspektrometriával kombinálva a klinikai vizsgálatok során.

    Újszülöttek szűrése: A HPLC-MS / MS tömeges alkalmazásának első példája a klinikai diagnózisban az újszülöttekben született veleszületett anyagcsere-hibák szűrése volt. Jelenleg a fejlett országokban ez egy rutinszerű módszer, és több mint 30 különböző betegséget fed le, beleértve az acetaldehidet, az aminosavakat, a zsírsavak oxidációs hibáit. Külön említést kell tenni a veleszületett rendellenességek vizsgálatáról, amelyek súlyos problémákhoz vezethetnek, ha azonnali intézkedéseket nem fognak tenni (pl. Megnagyobbodott szív vagy máj vagy az agyödéma). Az újszülöttek szűrésére használt HPLC-MS / MS alkalmazásának előnye az, hogy az összes aminosavat és az acil-karnitineket egyidejűleg gyors, olcsó és rendkívül specifikus módszerrel elemezzük.

    A gyógyszerek terápiás felügyelete: Az immunszuppresszáns sirolimusz (rapamicin) kifejlesztése és megvalósítása a szervátültetés megakadályozása érdekében a HPLC-MS / MS klinikai laboratóriumokba történő bevezetésének egyik fő ösztönzője volt. A modern HPLC-MS / MS módszer lehetővé teszi takrolimusz, szirolimusz, ciklosporin, everolimusz és mikofénsav egyidejű meghatározását.

    HPLC-MS / MS is használják citotoxicitási vizsgálatoknál, anti-retrovirális gyógyszerek, triciklusos antidepresszánsok, görcsoldók és más drogok igénylő egyes adagolási.

    HPLC-módszer IUMI lehetővé teszi különálló és számszerűsíteni a R- és S-enantiomerjei a warfarin koncentráció tartományban 0,1-500 ng / ml.

    Narkotikus és fájdalomcsillapító anyagok: A HPLC-MS / MS széles körben használatos ezen vegyületek analízisére a mintaelőkészítés és a rövid elemzési idő egyszerűsége miatt. Jelenleg az eljárást klinikai laboratóriumokban alkalmazzák a kábítószerek széles körének jelenlétére. Egyedi specifitását és a módszer érzékenysége lehetővé teszi az egyidejű elemzését több mint 500 különböző osztályba tartozó vegyületek egyetlen mintában minimális minta-előkészítés. Így a vizeletelemzés esetében a minta egyszerű hígítása 50-100 szor. Elemzésekor a haj helyett egy gerendát 100-200 haj megbízható detektálása a tények kábítószert fogyaszt csak egy hajszál.

    Endokrinológia és szteroid analízis: A HPLC-MS / MS széles körben alkalmazható számos endokrinológiai laboratóriumban szteroidok - tesztoszteron, kortizol, aldoszteron, progeszteron, ösztriol és sok más elemzéséhez.

    Egyre több laboratórium kezd el HPLC-MS / MS-t használni a D3 és D2 vitamin vérszintjének meghatározására.

    I. A szteroidok (szteroid profil) meghatározása.

    A kórházakban és klinikákban lévő laboratóriumoknak jelenleg lehetősége van több szteroid meghatározására HPLC / MS / MS segítségével. Ez nem igényel nagy mennyiségű mintát, ami különösen fontos a gyermekminták elemzésében.

      Olyan esetek, amelyekben tanácsos a szteroidok (profilalkotás) több meghatározását meghatározni:

  • A veleszületett mellékvese hyperplasia (Congenital adrenal hyperplasia, CAH) a szteroid bioszintézis veleszületett hibája. Ez egy örökletes betegségcsoport, amelyet a mellékvesekéreg enzimek helytelen aktivitása okoz, ami a kortizol termelésének csökkenéséhez vezet. A SAN megbízható diagnosztizálásához ajánlott a kortizol, androsztén-dione és a 17-hidroxi-progeszteron meghatározása. A HPLC / MS / MS lehetővé teszi mindhárom szteroid pontos mennyiségi meghatározását egy vizsgálatban 100% -os megbízhatósággal.
  • Az újszülöttek rutinszűrését az immunvizsgálatok segítségével magas pozitív és hamis negatív eredmények jellemzik. A HPLC / MS / MS, de az aldoszteron és a 11-deoxikortisol nem csak a kortizol HPLC / MS / MS meghatározásával teszi lehetővé a mellékvesekéreg elsődleges elégtelenségének megkülönböztetését a másodlagos daganattól.
  • A HPLC / MS / MS lehetővé teszi a szteroidok meghatározását a prosztatagyulladásban és a krónikus kismedencei fájdalom-szindrómában.
  • A HPLC-MS / MS lehetővé teszi a szteroidok profiljának meghatározását és azonosítja a mellékvesekéregben előforduló koraszülött pubertás okait kisgyermekekben. Megállapították, hogy a tesztoszteron, androsztén-dion, dehidroepiandroszteron (DHEA) és szulfátja koncentrációja ezeknél a gyerekeknél valamivel magasabb volt, mint a kontrollcsoport idősebb gyermekeiben.
  • A szérum aktív dohányosok, a passzív dohányzók és nem dohányzók, a jelenlétére analizáltuk 15 szteroid hormonok és a pajzsmirigy hormonok a tanulmány közötti kapcsolat a betegek ki vannak téve, hogy a füst, és a koncentrációk a hormonok.
  • A HPLC / MS / MS-t bizonyos női szteroid hormonok profiljában alkalmazzák a vizeletben.
  • A HPLC / MS / MS alkalmazásával a neuroaktív hormonok koncentrációját értékelték a diabéteszes neuropátia megelőzésére.
  • II. A pajzsmirigyhormonok meghatározása

    Szokásos módszerek a pajzsmirigyhormonok alapja általában radioimmunoassay, ami költséges, és lehetővé teszi, hogy meghatározza T3 és T4 csak, ami korlátozhatja a meghatározásának lehetőségét és teljes szabályozását pajzsmirigy funkcióit.

    • Jelenleg HPLC IUMI szimultán elemzéshez végzett öt mintát szérum pajzsmirigyhormon, beleértve tiroxin (T4), 3,3”, 5-trijód-tironin (T3), 3,3', 5'-(rT3), 3, 3'-diodiodironin (3,3'-T2) és 3,5-diodiodironin (3,5-T2) koncentrációja 1 -500 ng / ml.
    • A HPLC / MS / MS eljárást a tireoidektómia alatt szenvedő betegek hormonkészítményének elemzésére is felhasználják. Meghatározzák a tiroxin (T4), a triiodotironin (T3), a szabad T4 és a stimuláló hormon (TSH) pajzsmirigy koncentrációját a műtét után. Meghatároztuk, hogy a HPLC / MS / MS kiváló módja a TSH és a pajzsmirigyhormon-koncentráció közötti kapcsolat kialakulásának.
    • A HPLC / MS / MS módszert alkalmazták tiroxin (T4) meghatározására emberi nyálban és szérumban. A módszert nagy reprodukálhatóság, pontosság és 25 pg / ml kimutatási határ jellemzi. Tanulmányok kimutatták, hogy diagnosztikai függőség van a nyálban a T4-koncentrációban az euthyroidos betegek és a Graves-betegségben szenvedő betegek között.

    HPLC / MS / MS módszerrel Jelenleg van egy érzékenység, a specificitás, és precíziós szükséges megbízható detektálása a szteroidok biológiai folyadékokban, és így növeli a diagnosztikai lehetőségek javítására, különösen abban az esetben meghatározó készlet szteroidok.

    III. A 25-hidroxi-D-vitamin meghatározása HPLC / MS / MS segítségével

    A 25-hidroxi D-vitamin (25OD) a D-vitamin fő keringő formája és aktív formájának prekurzora. (1,25-dihidroxi-D -vitamin). Hosszú felezési ideje miatt a 25OD meghatározása fontos a D-vitamin státusának meghatározásához a beteg testében. A D-vitamin kétféle formában létezik: D3-vitamin (kolekalciferol) és D2-vitamin (ergokalciferol). Mindkét formát a megfelelő 25OD formákba metabolizálják. Nagyon fontos, hogy a diagnózis a jelenléte az analitikai módszerek, amelyek meghatározzák nagy pontossággal, mindkét formája vitamin, és lehetővé teszik ellenőrzés betegek zavarok a D-vitamin az alkalmazott módszerek még mindig nem teszi lehetővé külön meghatározása D2-vitamin és D3. Ezenkívül a D2-vitamin nagy koncentrációiban a D3 kimutatható mennyiségét alábecsülik. Másik hátránya a radioaktív izotópok használata. A HPLC / MS / MS módszer alkalmazása nemcsak a radioaktív izotópok használatának megakadályozását, hanem a vitamin mindkét aktív formájának külön meghatározását is lehetővé tette.

        Az eljárás a következő betegek esetében alkalmazható:

  • Ha gyanú merül fel a szervezetben a csökkent D-vitamin tartalmat illetően;
  • Ha egy megmagyarázhatatlan toxikus hatás gyanúja merül fel;
  • A csökkent D-vitamin-tartalmú betegek kezelésére;
  • A HPLC / MS / MS alkalmazása mindkét formában külön meghatározta a betegek monitorozását.
  • IV. Az immunszuppresszánsok HPLC / MS / MS meghatározása

    A szervátültetés után immunszuppresszánsokat kell szedni az egész életen át az elutasítási reakciók elkerülése érdekében. Nagyon szűk terápiás tartományban és magas toxicitás mellett az immunszuppresszánsok egyedi dózist igényelnek a maximális hatás elérése érdekében. Ezért rendkívül fontos, hogy mérik a főbb immunszuppresszánsok: ciklosporin A, takrolimusz, szirolimusz, és everolimusz szabályozására gyógyszert dózis minden egyes beteg függően a hatóanyag koncentrációja a vérben.

    Az immunvizsgálatot még mindig használják a felsorolt ​​gyógyszerek megfigyelésére, azonban ezek a módszerek drágák, és specifikusságuk, pontosságuk és reprodukálhatóságuk korlátozott. Vannak olyan betegek halálának esetei, akiknél az immunszuppresszánsok nem megfelelő adagolása az immunológiai módszerekkel kapott eredmények alapján történt. Jelenleg az immunológiai vizsgálatokat HPLC / MS / MS klinikai laboratóriumaiban váltják fel. Tehát a müncheni egyetem klinikáján a szirolimusz és a ciklosporin A tartalmának körülbelül 70 mintáját elemzik naponta HPLC / MS / MS rendszer alkalmazásával. Minden minta előkészítését és az eszköz vezérlését egy alkalmazott végzi. A laboratórium e módszerrel takrolimusz analízisre is vált.

    • Ismertetik a HPLC / MS / MS egyidejű meghatározására rutin takrolimusz, szirolimusz, aszkomicin demetiksisirolimusa, ciklosporin A és ciklosporin G a vérben. A tartományt 1,0 - 80,0 ng / ml koncentráció határozza meg. Ciklosporin esetében 25-2000 ng / ml. Az év során több mint 50 000 mintát elemeztek a laboratóriumban.
    • Mivel azt találtuk, hogy az egyidejű használata a takrolimusz és a szirolimusz pozitív terápiás hatást úgy kidolgozott egy egyszerű és hatékony HPLC / MS / MS módszerrel a külön meghatározása vérük klinikai elemzések. Egy minta elemzése 2,5 percet vesz igénybe 2,46% -7,04% pontossággal a takrolimusz és 5,22% -8,30% között a teljes analitikus görbe esetében a szirolimusz esetében. A takrolimusz meghatározásának alsó határa 0,52 ng / ml, sirolimusz - 0,47 ng / ml.

    V. A homocisztein HPLC / MS / MS meghatározása

    A homocisztein egy érdeklődés szív- és érrendszeri betegségek (tromboembólia, a szívbetegségek, érelmeszesedés), és más klinikai állapotok (depresszió, Alzheimer-betegség, osteoporosis, terhességi szövődmények, és mások.). A homocisztein analízisének létező módszerei, beleértve az immunvizsgálatot is, költségesek. Gyors HPLC / MS / MS módszert dolgoztunk ki a homocisztein rutin klinikai alkalmazásának elemzésére számos minta elemzése során. Az ionizációt elektrospray alkalmazásával végeztük. A módszer reprodukálható, rendkívül pontos és pontos. A módszer előnyei a reagensek alacsony költségei és a mintaelőkészítés egyszerűsége. Egy nap alatt 500 vagy több mintát elemezhetünk.

    következtetés

    Meg kell jegyezni, hogy bár a jelenleg használt jelentősen javult immunoassay módszerek, a technikai korlátok miatt elvileg ez a módszer soha nem lesz hasonló HPLC IUMI pontosságát és specifikusságát, hogy egy célvegyület, különösen jelenlétében metabolitok. Ez nem csak az ELISA módszer alacsony pontosságához, a hamis-pozitív és a hamis negatív eredmények nagy százalékához vezet, hanem nem teszi lehetővé a különböző klinikai egységekben az ELISA módszerrel kapott eredmények összehasonlítását. Alkalmazása HPLC-MS / MS kiküszöböli ezt a hátrányt, lehetővé teszi, hogy nagyon specifikus, pontos és gyors elemzéséhez nagyszámú minták nagy megbízhatósággal jelenlétében metabolitok és nem interferálnak a kísérő és endogén anyagok a plazmában és a vérben a betegek.

    Annak ellenére, hogy a műszerkomplexum látszólagos magas költségei - ahogy a világgyakorlat azt mutatja, megfelelő működéssel - ez a komplexum 1-2 éven át fizeti magát. Ez elsősorban az analízis alacsony költségének köszönhető, amely a tízes és több száz kapcsolat egyidejű elemzéséből és a drága diagnosztikai készletek vásárlásának hiányából ered. Ezenkívül a laboratóriumnak lehetősége van arra, hogy önállóan dolgozzon ki minden szükséges elemzési technikát, és nem függ a készletek gyártójától.

    A műszercsoport helyes konfigurációjának kiválasztása

    Sok különböző módszerek tömegspektrometria és típusú tömegspektrométer szánt megoldása a különböző problémák - a strukturális azonosítása komplex fehérje makromolekulák súlyát a több százezer dalton rutin nagy áteresztőképességű kvantitatív elemzése kis molekulák.

    A feladat sikeres megoldásához az egyik legfontosabb feltétel a megfelelő típusú berendezés kiválasztása. Nincs olyan univerzális eszköz, amely lehetővé teszi az analitikai problémák teljes spektrumának megoldását. Így a mikroorganizmusok azonosításának problémáját megoldó eszköz nem alkalmas a kis molekulák kvantitatív elemzésére. És fordítva. Az a tény, hogy a közös név ellenére ezek teljesen más eszközök, amelyek különböző fizikai elveken működnek. Az első esetben, ez a TOF tömegspektrométer egy lézeres ionizációs forrás - MALDI-TOF, és a második - tripla kvadrupol eiektrospray ionizáció - ICN-HPLC-vel.

    A második legfontosabb paraméter a megfelelő rendszerkonfiguráció kiválasztása. Számos tömegspektrometriai berendezés gyártója van. Az egyes gyártók eszközei nemcsak saját erősségeiket, hanem gyengeségeiket is tartalmazzák, amelyek általában inkább hallgatnak. Minden gyártó saját eszköztárat gyárt. Egy analitikus komplex költsége 100 000 és 1 000 000 dollár között van. Az optimális gyártó kiválasztása és a berendezés megfelelő konfigurálása nemcsak jelentős anyagi erőforrásokat takarít meg, hanem hatékonyabban is megoldja a feladatot. Sajnálatos módon sok példa van arra, hogy laboratóriumi felszerelést végeztek, anélkül, hogy ezeket a tényezőket figyelembe kellene venni. Az eredmény készenléti berendezés, pénz elpazarlása.

    A laboratórium sikeres működését meghatározó harmadik tényező a személyzet. A tömegspektrométerek magasan képzett személyzetet igényelnek. Sajnos egyetlen oroszországi egyetemen sem létezik modern gyakorlati tömegspektrometria, különösen a klinikai alkalmazások tekintetében, és az egyes laboratóriumok munkatársainak képzésének feladatait önmagukban kell megoldani. Természetesen a gyártó által a berendezés megkezdése után végzett 2-3 napos ismeretterjesztési tréning nem feltétlenül elégséges ahhoz, hogy megértsük a módszer alapját és megismerjük az eszközzel végzett munkát.

    A negyedik tényező a kész elemzési technikák hiánya. Minden laboratóriumnak megvan a saját prioritása, amelynek megoldásához saját módszereit kell kifejleszteni. Ezt olyan személy végezheti el, aki legalább 2-3 éves tapasztalattal rendelkezik az eszközön. A cégek-gyártók néha egy vagy két általános ajánlási típust kínálnak, de nem alkalmazkodnak a laboratóriumi feladatokhoz.

    A BioFarmExpert LLC sokéves tapasztalattal rendelkezik a különböző típusú tömegspektrométerek terén, valamint technikák kifejlesztését és nagy teljesítményű elemzések készítését. Ezért a következő szolgáltatásokat nyújtjuk:

    1. Az eszköz optimális konfigurációjának kiválasztása adott ügyfél feladatokhoz.
    2. A tandem tömegspektrométerek vezető gyártóinak beszerzése, szállítása és üzembe helyezése A személyzet fokozatos továbbképzése a berendezés indításától számított egy éven belül.
    3. Készenléti technikák és adatbázisok alapvető klinikai problémák megoldására.
    4. Elemzési technikák kifejlesztése és az ügyfél konkrét feladatainak megoldása a laboratóriumban személyzete bevonásával.
    5. Módszertani támogatás a munka minden szakaszában.

    Vérelemzés előzetes derivatizálással (TMS-származékok)

    Kétdimenziós gázkromatográfia: repülés közbeni tömegspektrometria a vérplazma-analízishez előzetes derivatizálással (TMS-származékok), amely a glükóz meghatározását mutatja be 5TMS

    Metabolitok elemzése vérplazmában révén kétdimenziós gázkromatográfia-TOF tömegspektrometria előzetes származékképzés (TMS-származékok) mutatja a glükóz kimutatására 5TMS egybeesés a értéke 901 fok.